半小时即可完成抗体杂交―——SNAP i.d. 抗体杂交加速器

    2008年Millipore推出了SNAP i.d.抗体杂交加速器，它彻底改变了抗体杂交的原理，将抗体杂交的时间从4到20个小时减少为30分钟。

    抗体杂交是Western blotting中操作最繁琐，耗时最长的一步。自其问世以来，人们就在为如何缩短其操作时间而苦恼，但一直没有多少进展。2008年，Millipore公司正式推出了SNAP i.d.抗体杂交加速器（如图1），把原来需要4个小时甚至两天的抗体杂交过程缩短到了30分钟，并且此种方法在保证检测灵敏度的同时，还极大地降低了杂交的背景，提高了信噪比。

    SNAP i.d.抗体杂交加速器由主体，托盘，和抗体收集盘三部分组成。托盘又分为单个托盘，双联托盘和三联托盘，可同时进行1到3片膜的操作。主体可以容纳两个托盘，所以每个SNAP i.d.最多可以同时检测6张膜。

    传统的Western blotting抗体杂交法是依靠被动地分子扩散来达到封闭膜，一抗识别抗原，二抗识别一抗，以及去除非特异性结合等目的。此过程缓慢且受到溶液与膜的接触程度，溶液体积，孵育时间，孵育温度，封闭剂溶解程度等诸多因素的影响，导致Western blotting结果重复性不好，而且对于低丰度蛋白的检出灵敏度不佳。Millipore的SNAP i.d.创新性地使用了真空抽滤的方法，使得封闭剂，抗体溶液和洗脱液主动地通过膜，并与膜上的蛋白发生反应。此种方法具有以下优点（见表1）：

（1）节约时间：通过真空抽滤的方法，使封闭，抗体孵育以及洗脱全过程从传统的4小时甚至两天缩短到30分钟。

（2）保证检测的灵敏度：由于抗原抗体的主动接触，且抗体溶液均匀穿透整张膜，使得抗体有机会充分地接触到膜内的蛋白质，提高了抗原抗体结合的成功率，保证检测灵敏度。

（3）降低杂交背景：

        由于抗体与膜的接触时间被缩短，极大地降低了抗体与膜的非特异性结合。

        通过真空抽滤的方法使得洗脱过程更为彻底，克服了传统洗脱方法的低效率。

        封闭剂与膜主动全方位的接触，封闭时间由一个小时降低到20秒，提高了封闭的效率，同时封闭剂浓度由5%的脱脂牛奶降低到0.5%的脱脂牛奶，大大地降低了脱脂牛奶因不能完全溶解而造成的高背景，以及可能发生的过度封闭等问题。

        延长抗体寿命：对于抗体而言，SNAP i.d.极大地降低了抗体暴露在室温中的时间，延长了抗体的寿命，增加了抗体重复使用的机会。

       高兼容性：既可以与上游各种蛋白转移膜包括各种PVDF膜和NC膜兼容，也可以和下游各种化学或荧光检测方法兼容。

表1：SNAP i.d.与传统抗体杂交法的比较

	SNAP i.d.抗体杂交加速器	传统抗体杂交法
封闭，抗体孵育，以及洗脱全过程的时间	~30分钟	4小时至两天
作用机制	主动作用过程	被动扩散过程
杂交效果	杂交均匀，高灵敏度	杂交不均匀，高灵敏度
杂交背景	低背景，更高信噪比	高背景，信噪比低
操作过程	操作简单	过程繁琐
处理能力	多张印迹膜平行检测	难以实现高通量
抗体寿命	抗体寿命长，且便于回收	抗体寿命短
检测蛋白丰度和分子量大小	检测各种广泛表达丰度的蛋白以及18~220 KDa（目前经实验证实的结合范围）	选用适当的PVDF膜可检测各种大小的蛋白
兼容性	与各种上游转膜和下游检测方法均兼容

    基于SNAP i.d.抗体杂交加速器的以上优点，该技术为各种表达丰度和各种分子量大小的蛋白质检测提供了一个快速，灵敏，方便，可靠的解决方案。SNAP i.d.还适用于快速优化抗体的浓度，大大减少了摸索实验条件所花费的时间，提高了工作的效率和实验的成功率，是优化抗体浓度的最佳选择。