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标题: RT-PCR中反转录酶的选择
详细内容:

Promega

      提到反转录酶,一定要提到Promega。它的MMLV和AMV应该是最早占有反转录市场的产品了吧,到现在市场占有率还很高,算是最经典的反转录酶产品了。RNase H 是RNA依赖的DNA聚合酶,利用点突变和缺失突变去除RNase H活性的MMLV,产生的cDNA产量和长度能更好(用于5kb以上的cDNA片段合成),因为在孵育时间长的时候,RNase H会开始降解模板。虽然许多研究者已经成功使用MMLV进行了一些cDNA的制备应用及分析,但是缺失了RNase H活性的逆转录酶为长cDNA的制备及包含高比例全长cDNA的文库制备提供了更好的选择。而Promega的价格也很容易为大家接受,10000U 的MMLV(50次)价格为410元,点突变MMLV(50次)只需要800元,每次反应只需要16元,相当于其他进口品牌的1/3-1/2,难怪那么多人一直青睐它。而AMV对温度的适应性更广,在37-58°C都可以进行反应,有利于二级结构的消除,适合复杂模板;同时其反转录效率更高,产量更大。

      ImProm-IITM逆转录酶是Promega推出的升级产品,适用于低丰度(最低至10个拷贝)或大片段RNA的反转录反应(模板片段可达13kb),性能相当强悍。Promega的反转录产品在进口试剂中以其最高的性价比而受到广泛的欢迎。

Invitrogen

      Invitrogen公司的SuperScript是最知名的反转录酶之一,可谓“莫愁天下无知己,天下谁人不识君”。现在,Invitrogen还模仿英特尔公司,搞了一个“SuperScript Inside”,让大家更加熟悉这个商标。从SuperScript I、II到SuperScript III,性能也在不断升级。SuperScript III是SuperScript II更加热稳定的突变体,在50℃半衰期长达220分钟,使cDNA产量更高,并能够增加基因特异引物的特异性;且没有RNase H的活性,有利于得到更多全长的cDNA,最长的cDNA产物片段超过了12kb。如果你的RNA模板GC含量较高或有二级结构,选它就没错了,最高可以在55℃进行反转录。如果你的样本量少也没关系,它的模板最低只要10pg总RNA就够了(对于高丰度管家基因,仅需0.1pg起始总RNA就可以用这个反转录酶检测出来!)。SuperScript III以预混合各组分后冻干的形式提供,不单减少重复加样而可能引起的偏差和污染,操作简单省事,更可在室温下稳定保存长达一年的时间,非常安全方便。      

     Invitrogen另外提供Thermo-X™ RT逆转录酶,是克隆自一种嗜热真细菌,提供高达70℃的热稳定性,因而即使是最具挑战性的模板也可以进行有效的RT-PCR。

 

 

 
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