E.Z.N.A. Cycle-Pure Kit

E.Z.N.A. PCR纯化试剂盒中文说明书适合于D6493/D6492-** 系列

说明：该中文说明书只提供用户参考使用，详细操作或说明请参照omegabiotek公司的操作说明书

准备工作

1 使用前，DNA Wash Buffer必须用无水乙醇进行稀释

D6493－00    加入18ml 100％的乙醇

D6493－01    加入60ml 100％的乙醇

D6493－02    每瓶加入60ml 100％的乙醇

注意：稀释后的DNA Wash Buffer需室温保存；所有步骤必须在室温下进行。

操作方案

所有的离心步骤必须在室温下进行。

1．进行琼脂糖凝胶/EB电泳，分析PCR产物。

2．判断PCR反应产物的体积，转移到一个干净的1.5ml的小离心管，加入等体积的Buffer NCP。

3．将样品转移到一个HiBindTM DNA离心柱，并装进一个干净的2ml收集管（已提供）里，置于小离心机内于室温下以10,000×g离心1min，弃去流出液。

4．加入750μl的SPW Buffer洗涤柱子；室温下10,000×g离心1min。

  注意：浓缩的SPW Wash Buffer必须用无水乙醇稀释，可按本书上页或瓶上标签指示稀释。

5．弃去流出液，将柱子重新套回2ml的收集管中，再加入750μl SPW Buffer至柱子，室温下10,000×g离心1分钟；

6．弃去流出液，并以10,000×g离心空柱1min以甩干柱基质。

这对得到好的DNA产量是至关重要的。

7. 把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上，将30~50μl（具体取决于预期的终产物浓度）的灭菌去离子水(或者PH8.0的TE Buffer)直接加到柱基质上,10,000×g离心1min以洗脱DNA。如果按上述条件再洗脱一次的话可以把残余的DNA洗脱出来，不过那样的浓度就会较低。

DNA的产量与质量：

把抽提到的样品稀释一定的倍数后，分别测量其在260nm和280nm下处的吸光度。回收得到的DNA浓度可按下列公式算出:

DNA的浓度=吸光度260×50×（稀释倍数）μg/ml

长度大于500bp的片段通常能纯化得到80%的产量。 而50bp~500bp的带则可达到50％~80％的回收率。

用A260与A280的比值可显示核酸的纯度，若其比值大于1.8，表示核酸浓度大于90%。另外，DNA的回收产量（或者是产物的质量）有时也主要取决于琼脂糖－EB电泳的情况。

可能出现问题及解决方法

    如果您在使用本PCR产物回收试剂盒时遇到问题，可使用下面表格来帮助您找出解决的方法。

可能出现的问题

 可能原因 建议解决方法:

低DNA产量 于样品中加入的Buffer CP的量太少 请按照使用说明加入足够量的Buffer CP.若DNA片段长度小于200bp，加入6倍体积的Buffer CP；若DNA片段长度大于4kb，则加入3倍体积的Buffer CP和1倍体积的双蒸水。

无DNA DNA Wash Buffer没有用无水乙醇稀释 按照使用说明来准备好Wash Buffer。

OD值与琼脂糖凝胶中的DNA产量不相符 从柱子上洗脱下来的痕量杂质增加了A260的值 确保按照步骤4和5的方法来洗涤柱子；另一方面,还取决于琼脂糖/EB电泳的质量.

点样时样品漂出孔外 在洗涤完之后没有把柱上的乙醇完全除去 按步骤6的说明离心柱子以甩干空柱,然后再进行下面的洗脱步骤.