1 试剂盒组成:
细胞裂解液,核酸裂解液,蛋白沉淀试剂,RNase溶液,DNA溶解试剂。
2 实验原理及流程:
(1)收集样品,加入细胞裂解液裂解红细胞,离心取上清;
(2)在上清液中加入核酸裂解液,裂解白细胞,离心取上清;
(3)上清中加入蛋白沉淀试剂,除去蛋白质;
(4)加入试剂沉淀出DNA后,用DNA溶解试剂重新溶解。
3 抽提不同材料的总DNA产量
物种和材料
样品起始量
DNA产量
RNase处理
人全血
补充:产量取决于全血中白细胞的数量
300μl
5-15μg
可选择
1.0ml
25-50μg
10.0ml
250-500μg
96孔板至少需20μl样品
50μl/孔
0.25-0.7μg
鼠全血
EDTA处理
6μg
肝素处理
6-7μg
96孔板
0.2-0.7μg
细胞系
K562(人)
3 x106
15-30μg
必须
COS(非洲猴)
1.5 x106
10μg
NIH3T3(老鼠)
2.25 x106
9.5-12.5μg
PC12( 嗜铬细胞瘤)
8.25 x106
CHO(仓鼠)
1-2 x106
动物组织
鼠肝脏
11mg
15-20μg
鼠尾
0.5-1.0 cm鼠尾
10-30μg
昆虫
Sf9细胞
5 x106
16μg
植物组织
马铃薯叶片
40mg
7-12μg
革兰氏阴性细菌
大肠杆菌JM109(过夜培养)
1ml
20μg
5ml
75-100μg
阴沟肠杆菌(过夜培养)
革兰氏阳性细菌
表皮葡萄球菌(过夜培养)
6-13μg
酵母
啤酒酵母(过夜培养)
4.5-6.5μg