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ReadyAmp基因组DNA（血液/血斑）纯化系统 |
| 详细内容： |
注意：本中文操作手册仅供实验参考，在实际使用中请详细对照promega原英文操作手册TB190
ReadyAmpTM基因组DNA纯化系统为您从血液或血斑中分离单链基因组DNA提供了简单、高效、安全和经济的方法,提取的DNA可以直接应用于扩增反应。整个纯化过程不到一个小时，而且无需有机溶剂抽提或乙醇沉淀。ReadyAmpTM基因组DNA纯化系统得到的单链DNA( ssDNA) 可直接应用于扩增反应和PCR试验而无需其他处理。
基因组DNA纯化的操作过程
用户需准备的材料
1.5 ml 离心管
56 ℃水浴或加热块
100℃ 水浴或加热块
A. 从全血中纯化DNA
在开始操作前，把一个水浴或加热模块的温度设定到56°C ，把另一个水浴或加热模块的温度设定到100°C。
1．将1ml的无核酸酶水加入到标记好的1.5ml离心管中。
2．向每管中加入1-400μl的全血，涡旋震荡5-10秒钟。
3．室温孵育10min。在此过程中每1-2分钟涡旋震荡一次样品。
4．室温下以最高转速（15,000rpm）离心样品2分钟。
5．弃去上清液，注意不要碰到沉淀。
6． 第一次使用该试剂盒时，请小心将经过高压处理的磁力搅拌棒放入装有ReadyAmpTM树脂的容器中，盖紧盖子并在磁力搅拌器上充分搅拌树脂悬浮液。
注意：请在搅拌树脂的过程中，移取ReadyAmpTM树脂的混悬液。
7．向每个样品中加入200μl的树脂混悬液。
注意：当树脂的体积小于5ml时，在即将使用前应用力蜗旋容器内的树脂，以确保树脂充分重悬。
8．震荡样品，使沉淀团块重悬。要确保所有的沉淀团块都被充分重悬。
注意：本中文操作手册仅供实验参考，在实际使用中请详细对照原英文操作手册 TB190。如遇到问题请与普洛麦格
9．在56°C水浴或加热块中孵育样品20分钟。
10．高速涡旋震荡样品5-10秒钟。
11．在100°C水浴或加热块中孵育样品8分钟。
12．高速涡旋震荡样品5-10秒钟。
13．室温下以最高转速（15,000rpm）离心样品2分钟。
此时，纯化的基因组单链DNA分布在上清夜中。DNA样品应该储存于4°C或-20°C或直接应用于PCR扩增试验。
注意：
1．在应用于50μl体系的扩增反应时，取决于起始材料的量，通常1-5μl的模板量是足够的。
2．如果DNA样品经过储存，使用前应按照第13步进行离心。可以用快速的狭线印迹来估计DNA产率，用已知质量的基因组DNA的不同浓度稀释液做比较。
B 从血斑中纯化DNA
在开始操作前，把一个水浴或加热模块的温度设定到56°C，把另一个水浴或加热模块的温度设定到100°C。
1．将1ml的无核酸酶水加入到标记好的1.5ml离心管中。
2. 向每管中加入9-25mm2的血斑。
3．室温孵育10min,在此过程中每1-2分钟涡旋震荡一次样品。
4．室温下以最高转速（15,000rpm）离心样品2分钟。
注意：本中文操作手册仅供实验参考，在实际使用中请详细对照原英文操作手册 TB190。如遇到问题请与普洛麦格
5．弃去上清液，使血斑和沉淀物质留在管底。
6． 第一次使用该试剂盒时，请小心将经过高压处理的磁力搅拌棒放入装有ReadyAmpTM树脂的容器中，盖紧盖子并在磁力搅拌器上充分搅拌树脂悬浮液。
注意：请在搅拌树脂的过程中，移取ReadyAmpTM树脂的混悬液。
7．向每个样品中加入200μl的树脂混悬液。
注意：当树脂的体积小于5ml时，在即将使用前应用力蜗旋容器内的树脂，以确保树脂充分重悬。
8． 震荡样品，使沉淀团块重悬。要确保所有的沉淀团块都被充分悬。
9． 在56°C水浴或加热块中孵育样品20分钟。
10．高速涡旋震荡样品5-10秒钟。
11．在100°C水浴或加热块中孵育样品8分钟。
12．高速涡旋震荡样品5-10秒钟。
13．室温下以最高转速（15,000rpm）离心样品2分钟。
此时，纯化的基因组单链DNA分布在上清夜中。DNA样品应该储存于4°C或-20°C或直接应用于PCR扩增试验。
注意：
1．在应用于50μl体系的扩增反应时，取决于起始材料的量，通常1-5μl模板量是足够的。
2．如果DNA样品经过储存，使用前应按照第13步进行离心。可以用快速的狭线印记来估计DNA产量，用已知质量的基因组DNA的不同浓度稀释液做比较。
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