A. 从30mg动物组织中提取基因组DNA，产量取决于样品。
研磨组织
可选步骤： 虽然没有必须使用机械匀浆器匀浆组织，但是用液氮研磨组织可以提高裂解效果和减少孵育时间。当液氮挥发完后，将粉末转移至1.5ml的离心管中，加入200ul buffer TL，开始第二步操作；
蛋白酶消化组织
1. 称取30mg的组织，加入1.5ml的离心管中，加入200ul buffer TL。将样品剪成一块块小块可以加速裂解效果。如果样品大于30mg，可按比倒地提高 buffer TL的用量，如样品为60mg，则加入400ul Buffer TL.
2. 加入25ul OB蛋白酶(D3496/D3396)或蛋白酶K(20mg/ml, D3395/D3495)，涡旋混匀，于55℃水浴摇床中振荡孵育至组织完全消化。如果没有水浴摇床，水浴时每隔20-30分钟混匀一次。消化时间取决于样品使用量和组织类型，一般3小时就能获得良好的消化效果，样品也可消化过夜。室温下，10,000×g离心5分钟去除不溶解的杂质，然后将上清液转移到新的离心管中。
3. 可选步骤：某些组织例如肝脏包含有高丰度的RNA，它可能会和DNA一起回收出来，一般情况下，RNA的污染并不会影响PCR操作，但可能会影响其它实验。因此，可加入20ul RNaseA(25mg/ml)混匀，至室温下放置2分钟，继续下面的操作；
4. 加入220ul Buffer BL，涡旋混匀。70℃处理10分钟。加入Buffer BL后，可能会产生一些沉淀，但不会影响DNA的回收。根据样品的使用量调节Buffer BL的体积；
5. 加入220ul 无水乙醇，涡旋混匀。根据样品的用量，调节无水乙醇的用量；
基因组DNA吸附至柱子上
6. 把HiBind DNA柱子套在2ml收集管中（已提供），将第五步得到的溶液全部转入柱子中（包括所有的沉淀物），8,000×g离心1min，弃去该收集管和流出液。
洗涤去除残留的蛋白质和盐分
7. 将HiBind DNA柱子套在新的2ml收集管，加入750μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g离心1min,弃去流出液和收集管；
8. 将HiBind DNA柱子套在新的2ml收集管中，再加入750μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g离心1min,弃去流出液；
9. 将HiBind DNA柱子重新套回2ml收集管中，10,000×g离心空柱2min以干燥柱子的基质；这一步对下面的洗脱步骤至关重要。
洗脱出基因组DNA
10. 将柱子置于1.5ml灭菌离心管，加入50-100μl 70℃预热的DNA Elution Buffer至柱子的膜中央。 室温静置于2min；
11. 室温下，8,000×g离心1min，以洗脱DNA。保留含DNA的流出液。把柱子置于另一个1.5ml离心管，重复用另50-100μl的预热的DNA Elution Buffer离心洗脱，弃去柱子。注意：第一次洗脱可得到60%~70%结合于柱上的DNA，而两次洗脱的总量一般可大于90%。然而，增加洗脱体积会减少最终产物的浓度。若想得到高浓度的DNA，可使用50μl ~100μl的DNA Elution Buffer来洗脱。洗脱体积低于50μl将大大减少产量。另外可使用第一次洗脱液进行第二次洗脱。
若有需要，可浓缩DNA。加入终浓度为0.1M的NaCl和2倍体积的无水乙醇。混匀完全后于-20℃放置10min，10,000×g离心15min，弃去上清液。加入700μl的80%乙醇后，以10,000×g离心2min，弃去上清，在空气中干燥沉淀并用20μl的灭菌双蒸水或10mM Tris-HCl（PH8.0）重悬DNA。
B:从培养细胞中提取基因组DNA
该方案适合于从5×106个细胞中纯化25ug的基因组DNA.
1. 准备细胞重悬液
1 a: 冰冻的细胞样品必须在开始之前进行解冻。离心收集细胞，用PBS洗涤一次，用200ul预冷的PBS重悬细胞，按第两步进行操作；
1 b: 如果细胞悬浮生长，1200×g离心收集5×106个细胞，去除培养基，用PBS洗涤一次，加入200ul预冷的PBS重悬细胞；
1 c: 如果细胞贴壁生长，用胰蛋白酶消化后，收集细胞，洗涤两次，最后用预冷的PBS洗涤两次；
2. 加入25ul OB蛋白酶或蛋白酶K（20mg/ml），混匀于65℃水浴于处理5分钟，让细胞完全裂解。
3. 加入220ul Buffer BL，涡旋混匀；于70℃处理10分钟。加入Buffer BL后，可能会产生一些沉淀，但不会影响DNA的回收。根据样品的使用量调节Buffer BL的体积；
4. 加入220ul 无水乙醇，涡旋混匀。根据样品的用量，调节无水乙醇的用量；
基因组DNA吸附至柱子上
5. 把HiBind DNA柱子套在2ml收集管中（已提供），将第五步得到的溶液全部转入柱子中（包括所有的沉淀物），8,000×g离心1min，弃去该收集管和流出液。
洗涤去除残留的蛋白质和盐分
6. 将HiBind DNA柱子套在新的2ml收集管，加入750μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g离心1min,弃去流出液和收集管；
7. 将HiBind DNA柱子套在新的2ml收集管中，再加入750μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g离心1min,弃去流出液；
8. 将HiBind DNA柱子重新套回2ml收集管中，10,000×g离心空柱2min以干燥柱子的基质；这一步对下面的洗脱步骤至关重要。
洗脱出基因组DNA
9. 将柱子置于1.5ml灭菌离心管，加入50-100μl 70℃预热的DNA Elution Buffer至柱子的膜中央。 室温静置于2min；
10. 室温下，8,000×g离心1min，以洗脱DNA。保留含DNA的流出液。把柱子置于另一个1.5ml离心管，重复用另50-100μl的预热的DNA Elution Buffer离心洗脱，弃去柱子。注意：第一次洗脱可得到60%~70%结合于柱上的DNA，而两次洗脱的总量一般可大于90%。然而，增加洗脱体积会减少最终产物的浓度。若想得到高浓度的DNA，可使用50μl ~100μl的DNA Elution Buffer来洗脱。洗脱体积低于50μl将大大减少产量。另外可使用第一次洗脱液进行第二次洗脱。
若有需要，可浓缩DNA。加入终浓度为0.1M的NaCl和2倍体积的无水乙醇。混匀完全后于-20℃放置10min，10,000×g离心15min，弃去上清液。加入700μl的80%乙醇后，以10,000×g离心2min，弃去上清，在空气中干燥沉淀并用20μl的灭菌双蒸水或10mM Tris-HCl（PH8.0）重悬DNA。
C:从老鼠尾巴中提取基因组DNA
该方案适合于从5×106个细胞中纯化25ug的基因组DNA。
1. 剪碎0.2-0.5cm的老鼠放置于1.5ml的离心管中，加入180ul Buffer BL。如果有必要的话，可火烧伤口以防止流血。
注：老鼠年龄不能超过6个星期，因为超过6个星期后，老鼠尾巴将很难裂解而很难得到理想的回收产物。如可能的话，可在小鼠2-4个星期时，切出小鼠尾巴，然后保存于70℃。
加入25ul OB蛋白酶或蛋白酶K(20mg/ml)，涡旋混匀，于55℃水浴摇床孵育1-4小时或至充分裂解。如果没有水浴摇床，可每隔20-30分钟涡旋混匀一次。不充分的裂解会导致柱子阻塞而降低DNA产量。样品的消化时间取决于小鼠尾巴的使用量和老鼠的年龄。2龄0.5cm小鼠尾巴一般只需要2小时就能获得良好的效果。对于年龄老的小鼠可消化过夜。注：骨和毛是不能消化的。
2. 室温下，10,000×g离心5分钟沉淀去除不溶解的杂质和毛发。小心转移上清液至新的离心管中，在吸取上清液时，不要吸到任何沉淀物。
可选步骤：小鼠尾巴中的RNA可能会和DNA一起纯化出来。一般情况下，RNA的污染不会影响到PCR反应，但可能会影响其它酶促反应。可加入15ul RNaseA(25mg/ml)混匀，于室温孵育2分钟。
3. 加入1倍体积的Buffer BL和一倍体积的异丙醇，涡旋混匀。涡旋混匀是必需的。
4. 将HiBind DNA 柱子套在2ml的收集管中，将第3步得到的溶液（包括所有的沉淀物）全部转移至柱子中。8,000×g离心1分钟以吸附DNA，弃去滤过液和收集管；
5. 将柱子套在2ml的收集管中，加入750ul Wash Buffer（已用无水乙醇稀释）；8,000×g离心1分钟，弃去过滤淮和收集管；
6. 将柱子套在2ml的收集管中，加入750ul Wash Buffer（已用无水乙醇稀释）；8,000×g离心1分钟，弃去过滤液；
7. 将柱子套在2ml的收集管中，室温下，8,000×g离心2分钟以甩干柱子的基质；这一步对去除柱子基质残余的乙醇是相当的关健的，不要省略此步；
8. 将柱子套在1.5离心管中，加入50-200ul预热至70℃的Elution Buffer。室温放置3分钟，（将柱子放置于60-70℃孵育3分钟有利于提高产量）。
9. 8,000×g离心1分钟，以洗脱DNA。重复用50-200ul预热的Elution Buffer洗脱柱子。
10. 将洗脱的DNA保存于-20℃。
D:从石蜡包埋的组织中提取基因组DNA
该方案适合于从5×106个细胞中纯化25ug的基因组DNA。
1. 剪称不超过30毫克的组织（～2mm3）于离心管中；
2. 加入1ml二甲苯，充分涡旋混匀以去除石蜡；
3. 室温下，10,000×g离心10分钟；不要打动组织沉淀吸取上清液；
4. 加入1ml无水乙醇洗涤，室温下10,000×g离心5分钟；不要打动组织沉淀吸取上清液；
5. 重复用无水乙醇洗涤；
6. 37℃，空气处理15分钟；
7. 加入200ul Buffer TL至组织中，然后按A步中第二步操作进行；
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