抗体纯化选用介质:
1.单抗药物采用UNOsphere SUPrA亲和介质进行捕获,UNOsphere离子交换中间纯化,最后用CHT陶瓷羟基磷灰石精纯,该生产工艺可直接得到高纯度的抗体,并能最有效的去除宿主蛋白、聚合体、DNA和内毒素。
2.Affi-Gel和Affi-Prep Protein A介质上偶联的Protein A可与免疫球蛋白的Fc链结合,能有效纯化各种来源的抗体,包括血清,腹水和培养液等。并且与哺乳动物的IgG具有更高的亲和性。
3.DEAE/CM 、Affi-Gel蓝胶是一种双功能配基亲和凝胶,其中共价结合的Cibacron blue F3GA染料配基可以结合白蛋白、蛋白酶和其他补体;DEAE和CM在不同条件下能有效结合IgG。所以同样可以一步纯化血清和腹水中的IgG,并且洗脱液中午蛋白酶的活性,是Protein A的经济替代品。
4.Macro-Prep High Q和High S两步离子交换策略非常便于IgM的纯化,纯度可达95%以上。
抗原纯化选用介质:
1.Affi-Gel Hz活化载体通过结合抗体分子Fc链的碳水化合物部分,可以实现对IgG分子的定向偶联,这种结合产生更特异的抗原-抗体作用,比其他介质高出100-300%的抗原结合量。
重组蛋白纯化选用介质:
1.Profinity IMAC介质是一种分离带有His肽标签的重组蛋白的金属螯合介质。Profinity IMAC以最新的UNOsphere为基质,IDA配基螯合金属Ni,具有高流速,高载量,高分辨率的特点,可一步纯化His标记的重组蛋白。
2.Profinity GST预装柱是在UNOsphere基质偶联个谷胱甘肽衍生物,可以与谷胱甘肽转移酶结合,用于纯化带有GST标签的重组蛋白。同样具有高流速,高载量,高分辨率的特点。
3.Profinity exact融合标签系统是基于亲和标签纯化蛋白质的系统,用于解决在其他亲和标签系统中普遍存在的标签去除的瓶颈。偶联在琼脂糖基质中枯草杆菌蛋白酶可以特异性识别枯草杆菌蛋白酶原的N端前结构域75个氨基酸的标签序列。利用含氟的洗脱缓冲液引发了枯草杆菌蛋白酶的酶切活性,可以快速而精确的从融合蛋白质中切下融合的标签,同时释放出纯化的无标签的目标蛋白。
4.不带标签的重组蛋白可用UNOsphere离子交换介质捕获,CHT陶瓷羟基磷灰石、氟代磷灰石CFT、Macro-Prep离子交换或疏水作为中间纯化或精纯的策略,其中UNOsphere Q/S具有高流速高载量低反压的特点,能有效的进行样品的粗分离;CHT陶瓷羟基磷灰石对样品中的盐不敏感,样品无需脱盐即可直接上样,可单独用磷酸盐浓度梯度洗脱,也可以先用氯化钠浓度梯度洗脱,再用磷酸盐梯度洗脱的双梯度洗脱模式,从而达到更高的分辨率。
包涵体蛋白纯化选用介质:
1.包涵体溶于8M尿素或6M盐酸胍中,可直接上样于高化学稳定性的UNOsphere、Macro-Prep离子交换介质进行纯化,也可以用CHT陶瓷羟基磷灰石I型纯化;对于含有His标记的重组包涵体,可用ProfinityIMCA金属螯合快速捕获并一步纯化,或者进行柱上复性同步纯化。
酶的纯化选用介质:
1. UNOsphere离子交换,Macro-Prep离子交换羟基磷灰石都能有效分离纯化各种酶,其中羟基磷灰石和Macro-Prep DEAE/CM对酶的吸附更加温和,不影响酶的活性。
2.Bio-Rex 70弱离子交换树脂了提供更高载量,更温和的吸附作用,并支持在位再生和清洗。
硫酸铵沉淀样品的纯化选用介质:
1.沉淀样品直接上Macro-Prep甲基或丁基疏水,洗脱组分再上CHT陶瓷羟基磷灰石进行双梯度洗脱精纯,或上离子交换进行精纯。
2.先以Bio-Gel P-6DG脱盐,再上离子交换单梯度洗脱或CHT陶瓷羟基磷灰石双梯度洗脱。
寡糖、多糖和多糖肽的纯化选用介质:
1.Bio-Gel P-2,P-4,P-6和P-10等可以高分辨率纯化寡糖和多糖,以聚丙烯酰胺凝胶为基质,不会与糖形成多氢键非特异性吸附,可获得高得率。 2. Macro-Prep DEAE/CM/High Q和High S离子交换一聚甲基丙烯酸甲酯为基质,可用于纯化多糖和多糖肽,分辨率高,无非特异性吸附。 |