生物素化凝血酶与限制级凝血酶相似，但共价结合了生物素，可以在酶切反应结束后，通过固定化链亲和素方便地去除蛋白酶。生物素化凝血酶的使用方法与未修饰凝血酶相同，与链亲和素琼脂糖的结合率大于99%。