核受体是一类配基调控的转录因子，能帮助检测出细胞内的类固醇和其它分子的存在。核受体通常定位于胞浆中，常常与相关联的调控蛋白形成复合物，核受体与配基分子的结合能够激发其转移到细胞核中，在细胞核内核受体通过其DNA 结合域特异性地结合到基因组DNA的靶片段上。DNA 的结合导致相邻基因表达的上调，由此，诱导出细胞对配基分子的反应。
研究哺乳动物细胞中的核受体引发的细胞活动的方法之一，是在一个“单杂交”系统中使用萤光素酶报告基因检测系统。在该系统中，核受体配基结合域(LBD) 与酵母GAL4 转录因子的DNA 结合域相融合。接着，在GAL4 上游激活序列(UAS) 的9 个重复片段的控制下，该融合蛋白核受体激活luc2P 萤光素酶报告基因。请参照总表图解。
pBIND-ERα Vector (Cat.# E1390) 上包含酵母Gal4 DNA 结合域(Gal4-DBD) 和雌激素受体- 配基结合域(ER-LBD) 的融合基因。pBIND-GR Vector (Cat.# E1581) 上包含酵母Gal4 DNA 结合域(Gal4-DBD) 和糖皮质激素受体- 配基结合域(ER-LBD) 的融合基因。
pFN26A(BIND) hRluc -neo Flexi® Vector(Cat.# E1380) 是为表达具有功能的融合蛋白而设计。该融合蛋白由酵母GAL4 基因的DNA结合域、一个连接片段和一个蛋白编码序列( 其5` 和3` 分别带有SgfI 和PmeI 位点) 组成，该基因由人巨细胞病毒(CMV) 即刻早期启动子控制。该载体可用于克隆和检测目的蛋白序列的假定转录激活域，例如许多核受体的配基结合域。
这些载体转染进细胞后，其表达的每一种融合蛋白一旦与配基结合，就可在位于其上游的GAL4 上游激活序列(UAS) 的调控下诱导萤光素酶的转录，就像pGL4.35[luc2P /9XGAL4 UAS/Hygro] 载体(Cat.# E1370) 或者GloResponseTM 9XGAL4 UAS-luc2P HEK293 细胞中表达的蛋白一样。这些产品使用的是去稳定化的luc2P ，该基因经过优化，比那些更接近天然萤光素酶的报告基因具有更高的灵敏度和更短的诱导时间。
每一个BIND 载体还包含一个海肾萤光素酶/ 新霉素抗性共报告基因。这一特点使得可以使用双萤光素酶进行数据归一化，也可以在不需要做更多的克隆的情况下，就能构建双稳定细胞系。与GenBank® 参考序列中全长雌激素受体相比，pBIND-ERa 质粒中的雌激素受体- 配基结合域序列有一个单氨基酸的差异，是在前者第420 位氨基酸的相应位置。欲了解与该序列相比较，GenBank® 参考序列的作用详情，请联系Promega 技术支持。 |